細(xì)胞計(jì)數(shù)板是一種常用的細(xì)胞計(jì)數(shù)工具,醫(yī)學(xué)上常用來計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞等而得名,也常用于計(jì)算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量,是一種常見的生物學(xué)工具。
細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用方法:
1、視待測(cè)菌懸液濃度,加無菌水適當(dāng)稀釋(斜面一般稀釋100倍),以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。
2、取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。
3、將菌懸液搖勻,用滴管吸取少許,從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴(不宜過多),讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),勿使氣泡產(chǎn)生,并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上(不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液,以免加蓋蓋玻片后,造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高),然后加蓋蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡)。
4、靜置片刻,使細(xì)胞沉降到計(jì)數(shù)板上,不再隨液體漂移。將血球計(jì)數(shù)板放置于顯微鏡的載物臺(tái)上夾穩(wěn),先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后,再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近,觀察時(shí)應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。
5、計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)中方格組成,按對(duì)角線方位,數(shù)左上、左下、右上、右下的4個(gè)中方格(即100小格)的菌數(shù)。如果是25個(gè)中方格組成的計(jì)數(shù)區(qū),除數(shù)上述四個(gè)中方格外,還需數(shù)中央1個(gè)中方格的菌數(shù)(即80個(gè)小格)。為了保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性,避免重復(fù)計(jì)數(shù)和漏記,在計(jì)數(shù)時(shí),對(duì)沉降在格線上的細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)應(yīng)有統(tǒng)一的規(guī)定。如菌體位于大方格的雙線上,計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,數(shù)左線不數(shù)右線,以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細(xì)胞計(jì)入本格,本格的下線和右線上的細(xì)胞按規(guī)定計(jì)入相應(yīng)的格中。見右圖:即本格中計(jì)數(shù)細(xì)胞為3個(gè)。
6、對(duì)于出芽的酵母菌,芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2-3次(每次數(shù)值不應(yīng)相差過大,否則應(yīng)重新操作),按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含細(xì)胞數(shù)量。
7、測(cè)數(shù)完畢,取下蓋玻片,用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,放入盒內(nèi)保存。